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SATA是将保护的巯基引入蛋白质，肽和其他分子的试剂，是S-乙酰硫基乙酸和丙酸的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯。由NHS酯与伯胺的反应能够形成稳定的共价酰胺键。胺与NHS酯通过亲核反应，释放N-羟基琥珀酰亚胺副产物。使用羟胺·HCl完成去保护(脱酰基)过程能够产生巯基，用于交联和其它应用。

存在于蛋白质，肽和其他化合物上的巯基在蛋白质化学或修饰反应中至关重要。某些情况下，硫醇在一些分子内是不可用的或不存在的，但有一些试剂和技术能够将巯基或二硫化物引入蛋白质和肽中，如Traut试剂和SPDP。

• 反应条件温和无变性。NHS酯反应可以在pH7～9和4～37℃的各种非胺缓冲液中进行，孵育时间从几分钟到过夜。
  
• 该反应只特定于伯胺。
  
• 巯基以被保护的形式引入，经修饰的蛋白分子能够被无限保存，然后可以用羟胺处理来暴露不稳定巯基，进行最终的共轭反应。

英文名称	N-Succinimidyl S-Acetylthioacetate
CAS号	76931-93-6
分子量	231.23
纯度	>95% on TLC
间隔臂(共轭后从胺基到硫基)	2.8 Å
结构式

• 脱盐柱，5mL。
  
• 羟胺盐酸Hydroxylamine·HCl。
  
• 磷酸盐缓冲液PBS：200～500mL，0.1M磷酸盐，0.15M NaCl，pH7.2～7.5。
  
• EDTA和1M NaOH用于修饰PBS缓冲液。
  
• DMSO(二甲基亚砜)。
  
• 脱乙酰化溶液：0.5M羟胺，25mM EDTA的PBS溶液，pH7.2～7.5。溶解1.74g羟胺·HCl和EDTA(0.475g四钠盐或0.365g二钠盐)在40mL反应缓冲液中。加入超纯水定容至50mL，用NaOH调节pH至7.2~7.5。

• SATA和SATP对湿度敏感。为了避免产品中的水分冷凝，开瓶前必须平衡到室温。
  
• 试剂在使用时溶解。NHS-酯部分易水解并无活性，因此不要制备用于储存的储备溶液，实验前配制，弃掉所有重构的试剂溶液。
  
• 避免使用含有胺(如Tris和甘氨酸)的缓冲液，因为胺对反应有竞争性。pH7.4～8.0的磷酸盐缓冲液(PBS)或HEPES缓冲液是涉及蛋白质应用的良好选择。
  
• 较高的pH会促进伯胺的酰化反应和这些NHS-酯试剂的水解(失活)。因此，用SATA和SATP修饰蛋白，包括加入过量摩尔比的试剂，修饰或水解反应最好在几分钟(pH9)或几小时(pH7)内完成。
  
• 当胺浓度较高时，预期的酰化反应比水解反应更快。

• 抗体与SATA的反应
  
  • 反应前将6～8mg的SATA溶于0.5mL DMSO(终浓度约55mM溶液)。
    
  • 将1.0mL蛋白溶液与10μL SATA溶液混合，室温下孵育30分钟。
    
    • 巯基引入量可以通过使用不同摩尔比的SATA与蛋白质来调整。一般使用60nmol蛋白质和550nmol SATA，SATA与蛋白质的摩尔比为9∶1。当使用更大摩尔量的SATA时，会使所有伯氨完全酰化，但是较高比例的酰化可能让蛋白质失活。建议每次增加或减少10μL的SATA量/mL蛋白溶液来调整。
• 从过量试剂和副产物中脱盐，纯化酰化蛋白质
  本步骤可以选择透析或脱盐柱。以下方法为脱盐柱使用方法：
  
  • 用两倍柱体积的反应缓冲液平衡脱盐柱。每1mL样品反应体积至少使用一个5mL的脱盐柱。
    
  • 将1.01mL反应混合物加入柱中。立即开始收集1mL流穿液。当反应混合物完全进入柱床，并收集完第一份流穿液时，加入反应缓冲液到柱中，继续收集排出的1mL流穿液。
    
  • 通过测量在280nm处具有峰值的流穿液，鉴定是否含有蛋白质。使用5mL脱盐柱，一般2～3次流穿液将含有大部分的蛋白质。其他流穿液含有少量蛋白质。
    
    • 此步骤后，修饰的蛋白质可以无限期储存，用于后期的脱乙酰化和巯基的产生(步骤C)。
• 脱乙酰化SATA-修饰蛋白产生亚磺酰基
  
  • 将1.0mL的SATA修饰的蛋白(乙酰化的蛋白)与100μL脱乙酰溶液混合。混匀并在室温下孵育反应2小时。
    
  • 使用脱盐柱从含羟胺的脱乙酰溶液中纯化巯基修饰的蛋白质。加入含有10mM EDTA的反应缓冲液，使用与B部分相同步骤使二硫键的形成最小化。在最终应用中请立即使用制备的蛋白质。在脱盐前后，可以使用bjbalb品牌试剂测定蛋白质的巯基含量。